Immunocytochemical localization of heat-shock protein 60-related protein in Beta-cell secretory granules and its altered distribution in non-obese diabetic mice

Summary Immuno-electron microscopy technique was employed to investigate the cellular distribution of 60 kDa heat-shock protein (HSP60) in pancreatic Beta cells of control and non-obese diabetic mice. In thin sections prepared from control mice, antibody to mammalian HSP60 cross-reacted with protein(s) located to mitochondria and secretory granules. In particular, prominent binding of the antibody was seen to the insulin core of the mature insulin-secreting granules. In comparison, very little immunoreactivity was observed with immature secretory granules or with the Golgi apparatus. No binding to secretory granules or mitochondria was observed with normal mouse serum or with unrelated sera. On Western blots, HSP60 antibody specifically interacted with a single 62 kDa islet cell protein. These results suggest the existence of an HSP60-related protein with a novel location in mature secretory granules of Beta cells. The preferential association of the HSP60-related protein with the insulin core was gradually lost in Beta cells of pre-diabetic non-obese diabetic mice, and correlated with the progression of insulitis. The decrease in the granular binding of the HSP60 antibody was accompanied by an increase in cytoplasm staining, and was concomitant with a significant expansion of the insulin core diameter. The altered distribution of the HSP60-related protein in prediabetic mice, together with our observation that immature secretory granules accumulate in these animals indicate that the presence of HSP60-related protein in secretory granules might be associated with the secretory function of Beta cells.     

糖耐康颗粒含量测定方法研究

目的：研究糖耐康颗粒的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱（HPLC）法测定糖耐康中迷迭香酸的含量,C18色谱柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为0.1%三氟乙酸－甲醇（60：40）,检测波长λ为330 nm,理论板数大于2 000,用标准曲线法测定;采用HPLC法测定人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量,采用C18色谱柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为水－乙腈,梯度检测方法,检测波长λ为203 nm,理论板数均大于2 000,用标准曲线法测定。结果：迷迭香酸在浓度为0.300-0.500 mg·mL^-1范围内线性关系良好,回归方程为：Y=1E+07X-7 334,R₂=0.999,测得加样回收率为97.32%（RSD 1.25%）。人参皂苷Rg1在0.138-0.220 mg·mL^-1范围内均有良好的线性关系,回归方程为：Y=2E+06X+34 864,R₂=0.999;人参皂苷Re在0.126 mg·mL^-1-0.250 mg·mL^-1范围内均有良好的线性关系,回归方程为：Y=2E+06X+39 879,R₂=0.999;人参皂苷Rb1在0.132-0.220 mg·mL^-1内均有良好的线性关系,回归方程为：Y=2E+06X+39 070,R₂=0.999。3种人参皂苷的加样回收率分别为：Rg1 97.97%（RSD 1.83%）;Re 101.80%（RSD 1.83%）;Rb1 98.35%（RSD 1.82%）。结论：该含量测定方法简便、快捷、可靠,可用于糖耐康的质量控制。     

HPLC法测定感冒清热颗粒中欧前胡素含量

目的建立HPLC法测定感冒清热颗粒中欧前胡素含量的方法,同时对6家不同企业生产的产品进行质量比对。方法采用HPLC法欧前胡素含量测定条件：色谱柱：Diamonsil（R）C18（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相：乙腈-水（49.5∶50.5）,检测波长：300 nm,流速：1.0 ml·min-1。,柱温：35℃;葛根素含量测定方法参照《中国药典》。结果欧前胡素线性范围为0.2955～11.82μg·ml-1（r=0.9999）,平均回收率为99.47%,RSD为0.69%（n=6）;不同企业生产的产品质量有差异,葛根素的含量以每袋计为12.20～24.00 mg。结论 HPLC测定欧前胡素的方法简便,准确,重复性好,可有效控制该制剂的质量。     

左归降糖益肾方含药血浆对高糖培养小鼠足细胞凋亡及Caspase-12表达的影响

目的 探讨在高糖作用下,体外培养的小鼠足细胞凋亡及内质网应激凋亡因子Caspase-12 mRNA和蛋白表达水平的变化及左归降糖益肾方含药血浆的调控作用.方法 将体外培养的小鼠足细胞随机分为空白组(A组,25 mmol/L葡萄糖,10％空白血浆)、高糖组(B组,200 mmol/L葡萄糖,10％空白血浆)、左归降糖益肾方含药血浆组(C组,200 mmol/L葡萄糖,10％含药血浆),4-苯基丁酸含药血浆组(D组,200 mmol/L葡萄糖,10％含药血浆).培养48 h后,采用免疫荧光细胞化学法、流式细胞术检测足细胞凋亡情况;Western blot法、RT-PCR法分别检测Caspase-12蛋白或mRNA表达水平的变化.结果 与A组比较:在高糖状态下B组足细胞凋亡率、Caspase-12 mRNA和蛋白的表达水平均升高,差异有统计学意义(P＜0.05).与B组比较:C组、D组足细胞凋亡率,Caspase-12 mRNA和蛋白的表达水平均降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).与C组比较:D组足细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P＜0.05);但Caspase-12 mRNA和蛋白的表达水平,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 Caspase-12表达上调,是足细胞凋亡的分子机制之一;10％左归降糖益肾方含药血浆可能通过降低Caspase-12的表达水平,从而保护足细胞.     

蚁参蠲痹胶囊联合西药治疗老年类风湿关节炎临床观察

目的观察甲氨蝶呤、依托考昔联合蚁参蠲痹胶囊治疗老年类风湿关节炎的临床疗效。方法将120例老年类风湿关节炎患者随机分为治疗组60例(男性14例、女性46例),对照组60例(男性15例、女性45例)。其中对照组患者口服甲氨蝶呤,每次10 mg,每周1次,口服依托考昔每次60 mg,每天1次。治疗组在对照组基础上加服蚁参蠲痹胶囊每次4粒,每天3次。分别对比观察两组治疗4、8、12周的临床疗效及药物不良反应发生率。结果治疗组临床疗效优于对照组,有显著差别(P0.05)。两组间药物不良反应发生率无显著差别(P0.05)。结论蚁参蠲痹胶囊联合西药治疗老年类风湿关节炎临床疗效显著,且用药安全。     

复方槐花颗粒中槐花和侧柏叶总黄酮提取工艺的优化

目的 优选复方槐花颗粒中槐花和侧柏叶总黄酮最佳提取工艺。方法 采用超声浸提法对复方槐花颗粒中槐花和侧柏叶总黄酮进行提取,以乙醇体积分数、超声功率、超声时间和料液比为考察因素,通过单因素试验和正交优选,确定较优提取工艺,并与常规的热回流提取法进行比较研究。结果 超声浸提法最佳提取工艺条件为：用60%乙醇,在料液比1:10和超声功率40kHz条件下超声波辅助连续提取2次,每次15min,槐花和侧柏叶总黄酮提取率可达93.31%。结论 该工艺研究为复方槐花颗粒中槐花和侧柏叶总黄酮共提提供一种新方法和思路,具有耗时短、能耗低、溶剂用量少和提取效率高等优势。     

麦滋林颗粒联合间苯三酚注射液治疗孕妇急性胃炎疗效观察

摘 要 目的： 观察麦滋林颗粒联合间苯三酚注射液治疗孕妇急性胃炎的临床疗效。方法: 102例急性胃炎孕妇采用随机数字法分为两组各51例。对照组予麦滋林颗粒0.67 g,餐前30 min用温水冲服,tid,观察组在对照组基础上加用间苯三酚注射液80 mg+0.9%氯化钠注射液20 ml,ivd qd。疗程均为2周。观察两组临床疗效,比较两组治疗前后症状积分变化及症状缓解时间。结果:观察组有效率明显高于对照组（94.12%vs78.43%,P<0.05),观察组治疗后胃脘痛、嗳气、口干积分较前明显下降（P<0.05）,且明显低于对照组（P<0.05）。观察组和对照组腹痛消失时间分别为（1.8±0.4）d和（3.9±1.1）d,差异有统计学意义（P<0.05）。两组患者治疗中均未出现严重不良反应。结论: 采用麦滋林颗粒联合间苯三酚注射液治疗孕妇急性胃炎临床效果较好。     

HPLC波长转换法同时测定小儿咳喘灵颗粒中(R,S)-告依春、绿原酸和甘草苷的含量

目的 建立高效液相色谱波长转换法同时测定小儿咳喘灵颗粒中(R,S)-告依春、绿原酸和甘草苷含量的方法。方法 样品采用70%甲醇溶液超声提取,采用Inertsil ODS-SP C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)分离;流动相：0.1%磷酸-乙腈,梯度洗脱;流速为1.0 mL·min^-1;检测波长：0~13 min为245 nm,13~50 min为217 nm。结果 (R,S)-告依春、绿原酸和甘草苷分别在0.700~14.000 μg·mL^-1、4.780~95.600 μg·mL^-1、1.050~21.008 μg·mL^-1内具有良好的线性关系;加样回收率分别为98.8%,102.8%和97.7%;RSD分别为1.2%,1.9%和1.4%(n=9)。结论 该方法简单易行,准确性和重复性好,可用于该制剂的质量控制。     

正交试验优选防感颗粒的提取工艺

目的确立防感颗粒的最佳提取工艺。方法应用正交试验和HPLC,以防感颗粒中R,S-告依春、白花前胡甲素、苦杏仁苷及甘草苷4种活性成分含量为指标,采用多指标综合评分法,确定防感颗粒的提取工艺。结果防感颗粒最佳提取工艺为:药材加8倍量水,煎煮3次,每次1.5 h,乙醇浓度为60%。结论优选出的工艺稳定可靠,可用于防感颗粒的提取。     

小儿双清颗粒治疗128例小儿急性上呼吸道感染的临床分析

目的：对小儿双清颗粒治疗小儿急性上呼吸道感染的临床效果进行分析。方法250例急性上呼吸道感染患儿,将其随机分为两组,治疗组128例,对照组122例,对照组采用西药治疗,即在0.9%氯化钠注射液中加入利巴韦林、青霉素钠氯化钠或头孢唑林钠静脉滴注,治疗组在对照组治疗基础上加用小儿双清颗粒治疗,疗效评定标准参照《中药新药临床研究指导原则》。结果治疗组治愈75例,占58.59%,显效32例,占25.00%,有效16例,占12.50%,无效5例,占3.91%,总有效率96.09%;对照组治愈55例,占45.08%;显效26例,占21.31%,有效22例,占18.03%,无效19例,占15.57%,总有效率84.43%,治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论小儿双清颗粒治疗小儿急性上呼吸道感染较单独西药治疗效果好,安全性高,值得临床上应用推广。